技术简介：

酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子来鉴定蛋白质之间的相互作用。GAL4转录因子由DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)组成，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中，将两个目的蛋白分别构建至BD和AD载体中并共转化酵母细胞，以重组GAL4转录因子。在酵母内表达的两个蛋白若发生相互作用，系统则表现出完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子，激活相应报告基因的表达，此后可在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。该系统中与BD融合的蛋白为诱饵蛋白（Bait），构建在pGBKT7表达载体上。与AD融合的蛋白为靶蛋白（Prey），构建在pGADT7表达载体上。原理图如下：

应用范围：

1、检测蛋白间的相互作用；

2、检测蛋白间互作的位点和结构域。

公司优势：

1、诱饵蛋白自激活检测，消除蛋白自激活影响；

2、互作检测组克隆不同梯度稀释，可直观观察互作强弱；

3、本司具有多种互作检测方法，可验证酵母杂交结果。

服务流程：

咨询下单—实验信息确认—载体构建—自激活和点对点检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

互作检测酵母梯度稀释点板图（单反拍照）。

送样要求：

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例：

结果初析：所有共转pGBKT7和pGADT7质粒的酵母菌在二缺培养基上都长出了克隆，说明共转化成功。将二缺培养基上的克隆挑取至四缺培养基中发现，除了共转化阳性对照质粒菌株正常长出克隆外，A+B实验组也可以正常长出克隆，而阴性对照、自激活检测组和A+C实验组都没有长出克隆，说明蛋白A和蛋白B之间存在互作的可能性，而蛋白A和蛋白C不存在互作关系。

结果初析：蛋白A与B和C之间都有互作关系，为了确认蛋白之间具体互作的序列和结构域，对截短序列进行点对点检测后，显示A和B的蛋白互作由MATH和LBD结构域介导，A和C的蛋白互作由RING和RSK-N结构域介导。