技术简介：

转录因子（TF）是一类具有特殊结构的蛋白质，也称为反式作用因子。转录因子通过与靶基因启动子区域的顺式作用元件特异性结合，行使调控基因表达的功能，根据其功能的不同可以分为转录激活因子和转录抑制因子。在植物中，转录因子在生长发育、形态建成、响应外界环境变化等方面发挥关键的调节作用。目前，鉴定转录因子激活/抑制活性的方法主要有酵母和植物细胞双荧光素酶检测系统。在酵母系统中，单独的BD蛋白可以与GAL4上游活化序列结合，但不能引起转录。然而，将一段具有转录激活活性的转录因子构建到BD载体上，若其表达产生的BD蛋白单独与UAS结合也可以引起下游报告基因的转录，那么就称之为酵母双杂交的自激活现象。反过来，可以利用这种自激活现象来验证某个转录因子是否具有转录激活活性。在植物系统中，将转录因子构建至含有GAL4结合域的载体上，随后与含有GAL4调控序列启动的荧光素酶表达载体共转，最后通过荧光素酶活性的变化以判断转录因子的激活/抑制活性。在检测时，可让目的蛋白与转录激活子VP16形成融合蛋白，通过报告基因活性的变化进一步判断转录因子的激活/抑制活性。原理图如下：（左侧酵母系统系统，右侧植物系统）

应用范围：

1、 转录因子激活结构域确定；

2、植物转录因子激活/抑制活性的检测。

公司优势：

1、本司有整套的酵母系统和植物表达系统质粒；

2、本司植物表达系统为高拷贝小骨架质粒，可以高效转化不同植物原生质体，从而提高荧光素酶检测数值，增加数据可靠性；

3、本司自研原生质体转化试剂盒可兼容多种植物原生质体制备和转化，使得检测可以在研究物种中进行。

服务流程：

咨询下单—确定实验信息—载体构建—酵母转化—β-半乳糖苷酶活性检测—结果交付。

咨询下单—确定实验信息—载体构建—植物原生质体—荧光素酶活性检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

酵母系统： 酵母平板图，β-半乳糖苷酶活性检测柱状图(附送阴阳性对照组)；

植物系统： 荧光素酶检测实验数据及分析柱状图(附送阴阳性对照组) ；

发表级别的组图。

送样要求：

植物组织需要活体寄送；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例（以酵母、植物细胞为例）：

结果初析：目的蛋白单独和融合VP16后分别转化酵母，并分析α-半乳糖苷酶活性。检测结果显示A蛋白为转录激活子，B蛋白为转录抑制子。

结果初析：目的蛋白单独和融合VP16后分别转化拟南芥原生质体，并分析荧光素酶活性。检测结果显示A蛋白为转录激活子，B蛋白为转录抑制子。