技术简介：

膜蛋白酵母双杂交系统是将泛素作为降解信号分子来用于膜蛋白之间的互作检测。在膜双杂交体系中，泛素被分为Cub和NubG两个结构域，并在互作检测时各自连接一个目的蛋白。Cub同时连接转录激活因子 LexA-VP16并形成融合蛋白（LexA-VP16是由细菌LexA-DNA结合域和单纯疱疹病毒VP16激活蛋白组成的人工合成转录因子），当两个目的蛋白存在相互作用时，NubG和 Cub 在空间上相互接近并形成完整的泛素分子，导致转录激活因子LexA-VP16被泛素专一性蛋白酶(UBPs)切割，游离的LexA-VP16进入细胞核后激活报告基因His3，Ade和LacZ的转录与表达。因为膜杂交系统的正常运行需要bait(Cub-LexA-VP16)和prey(NubG)位于胞浆中，因此不同的蛋白需要选择合适的载体。原理图如下：

应用范围：

1、检测蛋白间的相互作用；

2、检测蛋白间互作的位点和结构域。

公司优势：

1、诱饵蛋白自激活检测，消除蛋白自激活影响；

2、互作检测组克隆不同梯度稀释，可直观观察互作强弱；

3、本司具有多种互作检测方法，可验证酵母杂交结果。

服务流程：

咨询下单—实验信息确认—载体构建—自激活和点对点检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

互作检测酵母梯度稀释点板图（单反拍照）。

送样要求：

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例：

结果初析：所有共转pDHB1和pPR3-N质粒的NMY51酵母菌在二缺培养基上都长出了克隆，说明共转化成功。将二缺培养基上的克隆挑取至四缺培养基中发现，除了共转化阳性对照质粒菌株正常长出克隆外，诱饵质粒pDHB1-A与pOstI-NubI共转化菌株也可正常长出克隆，说明诱饵质粒顺利融合载体上的标签蛋白并可正常表达，可进行后续实验。同时，A+B、A+D实验组也正常长出克隆，而阴性对照、自激活检测组和A+C实验组都没有长出克隆，说明蛋白A与蛋白B和D之间存在互作的可能性，而蛋白A和蛋白C不存在互作关系。