技术简介：

细胞是形成生物个体的基本结构功能单位，植物细胞结构包括细胞核、细胞膜、细胞质、液泡、内质网、高尔基体、线粒体、叶绿体和过氧化物酶体等。蛋白在不同细胞结构中的定位决定了其功能，因此对蛋白质的亚细胞定位研究具有重要意义。GFP/RFP/mCherry/YFP/CFP等荧光蛋白通常作为报告基因用于亚细胞定位检测，将荧光蛋白融合与目标蛋白的N端或者C端，通过稳定遗传或瞬时转化技术使得融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白定位于不同的细胞结构中，通过添加细胞结构定位指示剂（染料或者蛋白定位Marker），在荧光显微镜下可观察确定目标蛋白的亚细胞定位情况。原理图如下：

应用范围：

1、蛋白在细胞中的具体定位；

2、蛋白适应环境变化的位置迁移；

3、不同蛋白之间在细胞中的位置影响等。

公司优势：

1、本司有多种用于亚细胞定位的荧光表达载体，可用于植物稳定和原生质体瞬时转化(表1)；

2、本司有多种亚细胞定位蛋白Marker，带有不同荧光标签且构建在不同植物转化体系载体上，定位Marker已在不同单双子叶植物中验证(表2，图谱见科凌生物质粒库)；

3、本司长期种植水稻、烟草、拟南芥等幼苗，实验周期短；

4、本司可根据老师要求安排不同植物种植，并进行后续亚细胞定位检测。

表1蛋白亚细胞定位荧光标签质粒

表2蛋白亚细胞定位Marker信息

服务流程：

咨询下单—受体材料确认—实验设计—亚细胞定位载体构建—瞬时转化—拍照记录。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

目的蛋白与Marker共定位显微图片(附送空载体对照组)；

发表级别的组图。

送样要求：

植物组织需要活体寄送；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例（以烟草叶肉细胞、拟南芥原生质体、水稻原生质体为例）：

结果初析：目的蛋白连接GFP标签，并与带CFP/mCherry的细胞结构定位Marker共转细胞，最终判断目的蛋白的定位。